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一文带你学会Cy7试剂的操作步骤
发布时间:2022-10-12   点击次数:307次
  Cy7试剂是各种花菁染料及其衍生物,常被应用于生物分子标记,荧光成像及其他荧光生物分析。它们广泛用于标记多肽、蛋白质和核酸等。Cy7是近红外花菁染料。
 
  氨基活性的Cy7,近红外荧光染料。此试剂可被用于产生Cy7-标记的生物分子,用于后续的小动物活体成像研究,药物设计及相关实验。Cy7中心加强聚亚甲基链的结构特点,与母结构相比其量子产率提高了20%,增加了其荧光亮度。
 
  Cy7试剂的操作步骤:
 
  水溶性Cy3NHS标记anti-GST多克隆抗体市场上买到的抗体如果含有其它蛋白或带氨基的缓冲液会影响标记,在标记前需纯化。
 
  1、在1L0.15MNaCl溶液中透析anti-GST抗体,常温透析4小时。
 
  2、在4°C用新鲜的1L0.15MNaCl溶液再透析过夜。
 
  3、第二天用1L0.1MNaHCO3(pH8.3)透析4小时。
 
  4、用0.22µm注射器过滤头过滤抗体溶液。
 
  5、用0.1MNaHCO3稀释少量的抗体,在280nm处测其紫外吸收值计算标记抗体的总量。
 
  6、用DMSO配置Cy3NHS(MW765.95)溶液浓度为10mg/mL;计算所需体积以得到想要的CyDyeNHS和抗体的比值(例如20:1),然后慢慢将其加入到抗体溶液中,同时在暗处常温缓慢搅拌45分钟。
 
  7、用1L0.15MNaCl溶液常温避光透析4小时除去未标记上的Cy3。
 
  8、在4°C用新鲜的1L0.15MNaCl溶液再避光透析过夜。
 
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